尊龙凯时(中国区)人生就是搏 人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人急性淋巴母细胞白血病细胞MKN45

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：1640（含NAHCO3 15 g/L） + 10% FBS + 1% P

传代方法：首次建议1:2传代，传代后2天更换培养基。

备注：用无菌离心管收集培养基，以便于对比培养。如果对比培养效果不理想，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，将其培养至良好状态，灌满完全培养液并封好瓶口，以实现最佳运输效果。收到细胞时，使用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，然后放入超净台内进行严格的无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。利用显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片是重要的售后依据，若无照片则默认为收到状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果未超过80%汇合度，将培养箱中的完全培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，继续放入37℃、5% CO2孵箱培养；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态；若细胞大部分脱落，迅速回到操作台，加入5ml完全培养基终止消化。
3. 轻轻吹打细胞使其完全脱落后吸出悬液，转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟，弃去上清液，并补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，用PBS清洗。
2. 加入0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化，轻轻吹打使其脱落，然后转移至15ml离心管，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml无血清冻存液（货号：C7001），混匀后放入冻存管中。
4. 将冻存管直接放入-80℃冰箱中，如需转入液氮罐，应在-80℃冰箱中存放至少24小时后再进行操作。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（记得佩戴保护面具），迅速放入37℃水浴解冻，直到无结晶后，用75%的酒精擦拭外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2细胞培养箱中。
4. 第二天更换新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

有些细胞在运输过程中容易脱落，这是正常现象。如发生较多脱离，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，收集上清作对比培养。此后加入胰酶1-2ml，轻轻操作，进行消化，最后重悬并分瓶传代。

五、售后条款

1）细胞出现问题时可重发的情况及判定标准：

1. 细胞在运输途中出现丢失、瓶身破损或严重漏液时，提供重发。
2. 细胞污染问题需在收到产品48小时内提交真实实验结果，核实后将重发。
3. 常温发货细胞静置24小时后或干冰发货细胞复苏后24小时内，大部分细胞未存活者，需提供清晰细胞状态照片，予以重发。
4. 干冰发货细胞复苏后24小时后或常温发货细胞未开封4小时内如出现污染，将重发。
5. 如有活性问题，需在收到产品7天内提供状态评估结果。
6. 收到细胞当天及第2、3天需拍照，若未告知视为产品合格；如4-7天内出现问题，需提供照片和详细操作步骤，由技术人员判断责任，重发。

2）细胞出现问题时不予重发的情况：

1. 客户造成的细胞污染。
2. 客户错误操作导致细胞状态不佳。
3. 非本库推荐培养体系使用导致细胞状态不佳。
4. 细胞状态不佳且未提供前三天照片。
5. 细胞在处理时经其他操作的。
6. 细胞在2天内未告知问题。
7. 视具体情况而定。

在细胞培养和相关实验中，请务必遵循以上指南，以确保细胞的存活和活性，这也是尊龙凯时(中国区)人生就是搏致力于为您提供优质产品和服务的承诺。